home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ The Arsenal Files 6 / The Arsenal Files 6 (Arsenal Computer).ISO / health / med9605a.zip / M9650438.TXT < prev    next >
Text File  |  1996-03-09  |  2KB  |  39 lines
  1.        Document 0438
  2.  DOCN  M9650438
  3.  TI    PCR in situ: aspects which reduce amplification and generate
  4.        false-positive results.
  5.  DT    9605
  6.  AU    Teo IA; Shaunak S; Department of Infectious Diseases, Royal Postgraduate
  7.        Medical; School, London, UK.
  8.  SO    Histochem J. 1995 Sep;27(9):660-9. Unique Identifier : AIDSLINE
  9.        MED/96121506
  10.  AB    PCR in situ promises the ability to amplify and detect very low levels
  11.        of target nucleic acid in tissues. Despite considerable effort, the
  12.        technique is still technically difficult and has not yet proved to be
  13.        reliable or reproducible. We have now identified a number of factors
  14.        which can contribute to the poor amplification of the target DNA and to
  15.        the generation of false-positive signals. These factors include the
  16.        effects of fixation, reagent abstraction, DNA degradation, DNA
  17.        end-labelling and product diffusion. We present evidence to show that
  18.        formaldehyde fixation cross-links histones to DNA and thus restricts the
  19.        subsequent amplification of target sequences by PCR. End-labelling of
  20.        DNA occurs when direct incorporation is used to detect amplified
  21.        products and this gives rise to false-positive signals. Amplified
  22.        products can also diffuse out of cells and into neighbouring cells which
  23.        do not contain target sequences. They can undergo re-amplification
  24.        within these cells giving rise to false-positive signals. We believe
  25.        considerable caution should be exercised in the interpretation of
  26.        results generated using PCR in situ.
  27.  DE    Autoradiography  Base Sequence  Blotting, Southern  Cell Line
  28.        Cross-Linking Reagents  DNA Damage  DNA, Viral/ANALYSIS
  29.        Electrophoresis, Agar Gel  False Positive Reactions  Formaldehyde  Gene
  30.        Amplification  Histones/CHEMISTRY  Human  HIV
  31.        Infections/DIAGNOSIS/VIROLOGY  HIV-1/GENETICS/ISOLATION & PURIF  In Situ
  32.        Hybridization/*METHODS  Molecular Sequence Data  Polymerase Chain
  33.        Reaction/*METHODS  Support, Non-U.S. Gov't  Tissue Fixation  JOURNAL
  34.        ARTICLE
  35.  
  36.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  37.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  38.  
  39.